СУФЛЁР

В отличие от театрального суфлёра, подсказывающего
артистам , виртуальный суфлёр рассказывает
об артистах .



ДОБРО  ПОЖАЛОВАТЬ!!!                   WELCOME!!!

Музыкальный фрагмент после загрузки каждой титульной страницы.
There is a musical fragment after loading each main page.



Статьи

Сравнение различных систем фермерства Gilthead Sea Bream (Sparus aurata): активность кишечных и печеночных ферментов и 13C-ЯМР анализ липидов

  1. Аннотация Для оценки различий в общих показателях здоровья и питательности морского леща ( Sparus...
  2. 2. Результаты и обсуждение
  3. 2.1. Плотский состав и активность кишечных пищеварительных ферментов
  4. Таблица 1
  5. Таблица 2
  6. 2.2. 13 C-ЯМР-спектры
  7. Рисунок 1
  8. Таблица 3
  9. фигура 2
  10. Рисунок 3
  11. 3. Экспериментальная часть
  12. 3.2. Измерения ЯМР
  13. 4. Выводы

Аннотация

Для оценки различий в общих показателях здоровья и питательности морского леща ( Sparus aurata ) были изучены эффекты полуинтенсивных наземных резервуаров и систем интенсивного разведения морских клеток и результаты по сравнению с отловленной дикой рыбой. Физиологическое состояние определяли путем измерения активности трех различных кишечных пищеварительных ферментов: щелочной фосфатазы (ALP), лейцин-аминопептидазы (LAP) и мальтазы; и активность печеночной ALP. Кроме того, было оценено содержание в печени белка, холестерина и липидов. 13C-ЯМР-анализ для качественной и количественной характеристики липидной фракции, извлеченной из мышц рыб, для полуинтенсивных и наземных резервуаров с интенсивными системами. Состав липидной фракции показал небольшие, но существенные различия в соотношении мононенасыщенных / насыщенных жирных кислот, при этом полуинтенсивный характеризуется более высоким содержанием мононенасыщенных и более низких насыщенных жирных кислот по сравнению с системой интенсивного разведения в наземных резервуарах.

Ключевые слова: дорада морского леща ( Sparus aurata ), ПНЖК, системы выращивания, пищевая аутентичность, физиологическое состояние питания, 13C ЯМР-профилирование.

1. Введение

Морской лещ Gilthead является одним из наиболее важных видов рыб, выращиваемых в Средиземноморском регионе, и его добыча все еще быстро расширяется [ 1 ]. Несмотря на то, что производство этих видов достигло высокого уровня качества и эффективности, знания о его потребностях в питании и процессах пищеварения очень скудны по сравнению с другими видами рыб [ 2 ]. В последние годы в нашей стране наблюдается рост спроса на морепродукты. Таким образом, как усилия по рыболовству (с последующим истощением рыбных ресурсов и развитием аквакультуры), так и импорт рыбы из других стран стали объектом мониторинга и исследования. По сравнению с мясом потребление морепродуктов ниже, несмотря на его питательные свойства [ 1 ]. Прежде всего, жирные кислоты, содержащиеся в рыбе, в частности эйкозапентаеновая кислота (20: 5 н- 3 или EPA), имеют важные функции для здоровья организма и отличаются от функций говядины и свинины, причем последняя богата холестерином. Напротив, жирные кислоты морепродуктов обладают способностью снижать уровень холестерина в крови и поэтому очень полезны для профилактики сердечно-сосудистых заболеваний [ 2 ].

В частности, жирные кислоты из морепродуктов имеют решающее значение в рационе человека, потому что они являются одним из наиболее широко доступных природных источников эйкозапентаеновой (EPA) и докозагексаеновой (22: 6 n -3 или DHA) кислот. Пищевое потребление n- 3 жирных кислот имеет важное значение для роста и, в частности, для здоровья митохондриальных и клеточных мембран. Действительно, n- 3 жирные кислоты участвуют в синтезе гемоглобина, механизмах свертывания, предотвращении ломкости капилляров и других процессах, таких как размножение. Некоторые заболевания молочной железы и нарушения менструального цикла возникают в результате чрезмерного поглощения насыщенных жирных кислот и изменения отношения n -3 / n -6. Кроме того, n- 3 обеспечивает лучшую переносимость углеводов у диабетиков и является предшественниками простагландинов.

Было предпринято несколько попыток определить состав жирных кислот в различных типах природных жиров, таких как рыбные липиды [ 3 ], молочный жир [ 4 ], животный жир [ 5 ] и пищевые масла, в частности оливковое масло [ 6 , 7 ]. Анализ химических параметров проводился с использованием традиционных методов [ 8 , 9 ] в сочетании с другими аналитическими методами [ 10 ]. Среди них было обнаружено, что 1Н-, 13С- и 31Р-ядерный магнитный резонанс (ЯМР) с высоким разрешением является ценным инструментом для анализа липидов (включая липиды рыб). В дополнение к составу жирных кислот и классам липидов, 13C-ЯМР, в частности, дает информацию о региоспецифическом распределении жирных кислот по триацилглицеринам (TAG) [ 11 , 12 ] и фосфолипиды (13C- и 31P-ЯМР) [ 13 , 14 , 15 ]. Знание структуры TAG также становится все более важным, поскольку стереоспецифическая структура влияет на метаболизм липидов [ 16 , 17 ] и биодоступность жирных кислот.

Хотя ткани рыб варьируются в зависимости от таких факторов, как время года, возраст, диета и факторы окружающей среды, между видами существуют значительные генетические различия. Различные химические сдвиги ацильных цепей в положениях sn-1,3 и sn-2 позволяют проводить количественный анализ распределения жирных кислот в TAG с помощью 13 C-ЯМР. Карбонильная область (172–174 м.д.), олефиновые сигналы (126–134 м.д.), глицериновая область (60–74 м.д.) и алифатическая область (19–35 м.д.) спектров 13C-ЯМР были использованы для того, чтобы качественно и количественно оценить состав липидной фракции морского леща дрозда ( Sparus aurata ), выращенного в различных системах земледелия [ 7 , 11 , 12 , 18 , 19 ]. По данным итальянской ассоциации рыбоводов (Associazione Piscicoltori Italiani API), наиболее важная доля коммерчески доступного морского леща на итальянском рынке выращивается методом интенсивного выращивания рыбы (как в наземных аквариумах, так и в морских клетках). http://www.api-online.it ). В настоящей работе были исследованы три различных метода выращивания рыбы: полуинтенсивный, интенсивный наземный резервуар и интенсивный морской сад, первый из которых открыл путь к интересным перспективам контроля качества рыбного продукта. В дополнение к генетическим факторам, различные органолептические характеристики рыб (цвет, вкус) могут влиять на тип и способ кормления, плотность популяции в аквариумах или клетках, активность в плавании и другие факторы окружающей среды (температура, соленость, pH, оксигенация и т . Д. ). и (в пределах определенного диапазона) химический состав, в частности, липидного компонента.

Чтобы оценить возможные различия в питательной ценности, было изучено влияние трех систем выращивания на несколько параметров желудочно-кишечной функции, описывающих общее состояние здоровья образцов, и проведено сравнение с диким типом (использованным в качестве контроля). Общее сходство физиологического состояния выращенных рыб с таковым у дикого морского леща позволило нам сосредоточить последующие исследования на оценке качественного и количественного состава липидной фракции, извлеченной из мышц рыбы. В частности, насыщенные и незаменимые полиненасыщенные жирные кислоты ( n- 3 и n -6) образцов коммерческого разведения дорады морского леща ( Sparus aurata ), полученные с использованием различных методов выращивания рыб: полуинтенсивные (бассейн Акватина, Фриголе-Лечче, Апулия, Италия) и интенсивный в наземных резервуарах (система аквакультуры Maribrin srl, 8 км к югу от Бриндизи, Апулия, Италия) были дополнительно изучены методом 13C-ЯМР.

2. Результаты и обсуждение

Пищевое физиологическое состояние (оцениваемое путем измерения активности трех различных кишечных пищеварительных ферментов и состава мякоти) и характеристика ЯМР липидных фракций будут обсуждаться отдельно.

2.1. Плотский состав и активность кишечных пищеварительных ферментов

Результаты, касающиеся содержания белка в печени, показали, что в ходе исследования изменилось только количество белка, измеренное у полуинтенсивных разводимых рыб, причем оно было выше (803,17 ± 38,63 мг белка / г сухой ткани, данные не показаны) в начале испытания и ниже. в конце (377,73 ± 4,15 мг белка / г сухой ткани), в то время как он оставался неизменным в наземных аквариумах для интенсивных и морских животных. Содержание печеночного белка в рыбе, выращенной в наземных аквариумах, было самым высоким в конце испытания, тогда как содержание липидов было ниже по сравнению с другими выращенными группами рыб. Кроме того, для оценки общего состояния здоровья выращенной рыбы для сравнения приведены данные по дикому морскому лещу, отловленному в конце испытательного периода. Содержание холестерина оказалось одинаковым при всех условиях выращивания рыбы, но ниже по сравнению с контролем дикого типа (,).

Рыбы, выращенные в полуинтенсивных и в интенсивных условиях морских клеток, показали значительно более высокую активность кишечной щелочной фосфатазы (ALP) во время испытания, но никаких существенных различий в ферментативной активности ALP не наблюдалось в конце испытания для всех исследованных групп. по отношению к контролю. Кроме того, в случае мальтазной активности полуинтенсивная и интенсивно выращиваемая в морской клетке рыба проявляла более высокую активность по отношению к рыбе, выращенной в наземных интенсивных условиях, при этом разница в активности становилась незначительной в конце испытания. Что касается активности лейцин-аминопептидазы (LAP), в начале исследования не было выявлено существенных различий между группами. Тем не менее, в конце этого времени рыбы в наземных аквариумах с интенсивным выращиванием показали более низкую активность, в то время как рыба с полуинтенсивным и интенсивным выращиванием в морских клетках не показала существенных различий между ними и контролем. Активность ALP в печени не показала значительных различий между группами, за исключением исходного значения, измеренного у полуинтенсивно выращиваемой рыбы. В целом, ферментативная активность, измеренная у выращенной рыбы в конце испытания, не показала существенных отличий от таковой у дикого морского леща () в конце испытания. Из-за сходства физиологического состояния рыб, выращенных в режиме на суше и в морских клетках, последующие исследования были сосредоточены на оценке качественного и количественного состава липидной фракции, извлеченной из мышц рыб только двух систем выращивания: полу- интенсивный и наземный интенсивный, поскольку последняя является наиболее распространенной коммерческой системой интенсивного разведения (ISMEA-Istituto di Servizi per il Mercato Agricolo Alimentare, http://www.ismea.it ).

Таблица 1

Содержание печеночного белка, липидов и холестерина для трех разных систем разведения и дикие образцы (контроль) в конце испытания. Каждое значение представляет собой среднее значение ± стандартное отклонение 3-х повторностей.

(мг / г сухой ткани) Полуинтенсивный Наземные интенсивные морские клетки Дикий морской лещ Белок 377,73 ± 4,15 585,88 ± 32,82 488,57 ± 15,89 486,45 ± 15,31 Липиды 626,00 ± 62,39 358,92 ± 30,05 414,68 ± 56,52 506,27 ± 75,44 Холестерин 6,31 ± 0,76 9,1 0,11 6,05 ± 0,01 11,07 ± 0,57

Таблица 2

Значимость различий (p-значений) в содержании печеночного белка, липидов и холестерина для трех различных систем разведения и диких образцов (контроль) в конце испытания на основе t-теста для 3 независимых образцов. Однородность дисперсий всегда выполняется при значении р 0,05.

Полуинтенсивный по сравнению с наземным интенсивным Полуинтенсивный по отношению к морским клеткам Полуинтенсивный против дикого морского леща Земной интенсивный по отношению к морским клеткам Земной интенсивный против дикого морского леща Морские клетки против дикого морского леща Белок <0,001 0,004 <0,001 0,010 0,009 0,876 Липиды 0,003 0,006 0,069 0,206 0,035 0,168 Холестерин 0,003 0,589 <0,001 <0,001 0,004 <0,001

2.2. 13 C-ЯМР-спектры

Спектры 13C-ЯМР различных выращенных образцов Sparus aurata (наземные резервуары, интенсивные и полуинтенсивные в конце испытания) обрабатывали, применяя коррекцию базовой линии (используя полиномиальную функцию). Затем, чтобы облегчить интеграцию пиков, возникающих от n- 3 жирных кислот в положениях sn-1,3 и sn-2, деконволюцию проводили в карбонильной и метильной областях спектров. Наконец, интеграция сигналов выбрана по их значимости на основе литературных данных [ 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25 ], было выполнено.

Чтобы рассчитать состав жирных кислот для каждого образца, средневзвешенное значение сигналов при 62,01 м.д. и 68,83 м.д., относящихся соответственно к α- и β-углеродам глицериновой группы, было выбрано для нормализации в качестве внутреннего стандарта [ 26 ]. Типичный 13 С-ЯМР спектр липидной фракции морского леща-дрозда показан на фиг. Основные различия между образцами из двух разных систем земледелия отражаются на интенсивности сигналов в спектрах 13C-ЯМР. Расширение области карбонильных атомов углерода (атомов C1) (173,5–172,0 млн -1) показано на рис. Резонансы назначались в соответствии с предыдущими исследованиями липидов рыб [ 9 ]. В целом, химические сдвиги карбонильных атомов углерода жирных кислот в триацилглицеролах зависят от региоспецифического положения (является ли жирная кислота цепью sn-1,3 или sn-2), а также от положения и числа двойных связей в ненасыщенных жирные кислоты [ 27 , 28 ].

Рисунок 1

Вверху слева кишечная активность щелочной фосфатазы; нижняя левая кишечная активность лейцин-аминопептидазы; вверху справа - кишечная мальтазная активность; нижняя правая печеночная фосфатазная активность. Данные по диким образцам, использованным в качестве контроля, приведены только за последний месяц испытательного периода. Каждое значение представляет собой среднее значение ± стандартное отклонение 3-х повторностей. Пары значительно отличающихся средних значений (на основе t-критерия для независимых выборок, p-значения <0,05) помечены одинаковым символом. Однородность дисперсий всегда выполняется при значении р 0,05.

Интенсивности резонансов ацильных цепей в триглицеридах описывают профиль жирных кислот различных образцов. Химические сдвиги карбонильных атомов углерода жирных кислот связаны с различиями в специфическом этерифицированном положении на глицерине: те, которые на высоких частотах (защитные сигналы) связаны с жирными кислотами, этерифицированными в 1,3 положениях глицерина, тогда как соответствующие жирные кислоты в положении 2 защищены 0,40 ч / млн по отношению к sn-1,3. Эта разница в химическом сдвиге наблюдается всегда, независимо от исследуемой жирной кислоты.

В карбонильной области спектров 13C-ЯМР () сигналы насыщенных жирных кислот (стеариновая кислота, пальмитиновая кислота) и олеиновой кислоты обнаруживаются в одном и том же порядке с высоких частот (положение sn-1,3 в глицериновой части) ) к низким частотам (sn-2 в глицериновой части), в то время как пики линолевой и линоленовой жирных кислот перекрываются (в области используемых инструментов), чтобы дать один сигнал (не показан). В частности, полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК) ряда n- 3 (докозагексаеновая кислота, ДГК и эйкозапентаеновая кислота, ЭПК) более защищены от других жирных кислот [ 29 ].

Назначения были подтверждены резонансами, присутствующими в области виниловых углеродов, где, несмотря на большее перекрытие, можно различить сигналы, связанные с n- 3 ПНЖК, от полиненасыщенных жирных кислот, не принадлежащих к серии n- 3 ( n - 6 PUFA).

Следует отметить, что в исследованных образцах пальмитиновая (16: 0) и стеариновая (18: 0) жирные кислоты являются наиболее распространенными среди насыщенных ЖК, в то время как олеиновая кислота (18: 1 n -9) преобладает среди мононенасыщенных жирных кислот. кислоты. С другой стороны, n- 3 жирные кислоты, в частности DHA и EPA, являются основными составляющими полиненасыщенной фракции. Во всех образцах, независимо от рассматриваемых систем земледелия, соотношение ЭПК / ДГК является приблизительно постоянным и составляет около 1: 2 для всех экстрактов. Как уже сообщалось в других образцах рыб, в данном случае полиненасыщенные жирные кислоты предпочтительно этерифицированы в положении sn-2 глицерина, тогда как насыщенные и мононенасыщенные жирные кислоты связаны в положении sn-1,3.

Таблица 3

Процентное и стандартное отклонения жирных кислот в липидных фракциях (интенсивные и полуинтенсивные образцы), рассчитанные методом 13 C-ЯМР-спектроскопии. (SFA: насыщенные жирные кислоты; PUFA: полиненасыщенные жирные кислоты; n-3 HUFA: высоконенасыщенные жирные кислоты). Каждое значение является средним из трех повторностей. Значительные различия в средних значениях обозначены как «*» (р-значение 0,004) или «#» (р-значение 0,02) на основании t-критерия для независимых выборок. Однородность дисперсий всегда выполняется при значении р 0,05.

Система выращивания Интенсивный Полуинтенсивный 22: 6 n -3 7,8 ± 2,5 6,1 ± 1,7 20: 5 n -3 4,1 ± 1,6 3,6 ± 0,4 18: 3 n -3 8,0 ± 2,7 9,7 ± 3,9 18: 1 n -9 24,1 ± 0,6 * 30,9 ± 1,9 * SFA 39,5 ± 0,7 # 35,5 ± 1,7 # PUFA 17,0 ± 2,3 15,6 ± 4,2 n -3 HUFA 19,9 ± 1,4 19,7 ± 3,0 отношение n -3 / n -6 1,2 1,3 соотношение 18: 1 n -9 / SFA 1.6 1.2

Процентный состав липидного компонента был проанализирован для различных систем земледелия. Результаты, полученные для образцов (из данных 13C-ЯМР), показаны в. Образцы обоих типов показывают примерно одинаковое соотношение n- 3 и n- 6 жирных кислот, с несколько более высоким соотношением в образцах S. Aurata, относящихся к полуинтенсивной системе земледелия. Никаких существенных различий специально не наблюдалось для DHA, EPA и 18: 3 жирных кислот для двух исследованных систем выращивания. Также содержание PUFA не показывает существенных различий. С другой стороны, небольшие, но существенные различия были очевидны в отношении мононенасыщенных / насыщенных жирных кислот. Образцы системы интенсивного разведения в наземных резервуарах показали более высокое содержание насыщенных жирных кислот и более низкое содержание мононенасыщенных жирных кислот по сравнению с полуинтенсивными. По-видимому, это единственное существенное различие с точки зрения питательной ценности, обнаруженное для рыб, выращенных с использованием двух исследованных коммерческих систем: полуинтенсивных и наземных аквариумов. Для объяснения этих данных или выявления дополнительных различий и / или корреляций потребуется дальнейший анализ образцов, возможно взятых в течение всего испытательного периода. 30 ].

фигура 2

Спектры 13C-ЯМР в CDCl3 липидной фракции Sparus aurata .

Рисунок 3

Расширения 13 С-ЯМР спектров липидных фракций Sparus aurata относительно карбонильной области углерода. 1,3-поз. и 2-поз. относятся к положению этерифицированных жирных кислот на глицерине (вверху: интенсивно; снизу: полуинтенсивно; SFA: насыщенные жирные кислоты).

3. Экспериментальная часть

3.1. Подготовка образцов и анализ ферментативной активности

Испытание проводилось в промежутке времени между маем и ноябрем в регионе Апулия (Италия), и были проведены три различных отбора проб. Коммерческий экструдированный корм (Biomar-Treviso, Италия) использовали для всех рыб со скоростью кормления 1-2% массы тела рыбы в день, 7 дней в неделю. Конечная плотность разведения рыбы составляла 4, 15 и 25 кг / м3 для полуинтенсивных, морских клеток и наземной интенсивной системы, соответственно. Ферментативные активности измеряли в кишечнике и гомогенате печени, согласно Storelli et al . [ 31 ], используя спектрофотометрические методы.

3.2. Измерения ЯМР

Липидные фракции, полученные из мышечной ткани Sparus aurata , были извлечены с использованием метода Bligh & Dyer [ 32 ] и проанализированы с помощью 1D и 2D ЯМР спектроскопии. Образцы ЯМР готовили путем сушки экстракта в потоке азота и затем растворяли в 1 мл CDCl3. Спектры ЯМР были получены при 301,15 К на Bruker Avance DPX 400 МГц. CDCl3 использовали в качестве растворителя, и химический сдвиг указывали на TMS по остаточным пикам протонного растворителя в качестве внутренних эталонов (δΗ = 7,24 ч / млн; δC = 77,0 ч / млн).

Спектры 1H-ЯМР были получены при частоте 400,13 МГц, импульсная программа zg, 32K точек данных, ширина спектра 11990 Гц, 128 сканирований с задержкой повторения 3 с. Спектры ЯМР 13C {1H} были получены в соответствии со следующими параметрами: импульсная программа zgig30, ширина спектра 99911 Гц, точки данных 256K, задержка повторения 2,5 с, 4 фиктивных сканирования, 6000 сканирований. Спектральная обработка, интеграция и деконволюция выполнялись с использованием программного обеспечения Topspin 1.2 (Bruker Biospin). Резонансы жирных кислот были назначены на основании литературных данных [ 17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22 ].

4. Выводы

Полученные результаты показывают, что морской лещ выращивается в особых условиях, как в полуинтенсивных, так и в интенсивных (наземных аквариумах и морских клетках) системах, присутствующих в конце периода размножения, физиологическое состояние питания, сопоставимое с таковым у дикого морского леща. захвачен в прибрежной зоне (контроль). Измеренная активность кишечных ферментов была одинаковой во всех образцах, независимо от источника (полуинтенсивные, интенсивные наземные резервуары, интенсивные морские клетки и дикий тип).

Для полуинтенсивных и наземных резервуаров с интенсивной системой состав липидной фракции, извлеченной из плоти рыб, был получен с помощью 13 С-ЯМР и проанализирован профиль липидов. Не наблюдалось значительных различий в процентах содержания ПНЖК (DHA, EPA, 18: 3) для образцов, полученных из двух исследованных систем выращивания [ 33 , 34 , 35 ]. С другой стороны, небольшие, но существенные различия были обнаружены в отношении мононенасыщенных / насыщенных жирных кислот, при этом полуинтенсивный характер характеризуется более высоким содержанием мононенасыщенных и более низких насыщенных жирных кислот в отношении системы интенсивного разведения в наземных резервуарах. Поэтому представленные данные позволяют предположить, что в используемых экспериментальных условиях соотношение мононенасыщенных / насыщенных жирных кислот является наблюдаемым параметром, учитывающим различия в качестве питательных веществ в содержании липидов морского леща S. Aurata, повышенного в системах интенсивного и полуинтенсивного выращивания.

Новости

Курсы сео продвижения харьков
Все больше людей хотят научиться раскрутке сайтов в современных системах поиска, достигать вершин выдачи популярных запросов, зарабатывать на этом деньги. Сегодня даже ребенок понимает, что любое видео

Бесплатная автоматическая раскрутка сайта
Зачем нужна сео оптимизация сайта? На первых порах это один из самых эффективных способов продвижения. Она помогает улучшить ранжирование площадки в поисковых системах, улучшить выдачу ресурса по запросам

Услуги сео продвижения
Используя услуги SEO оптимизаторов, веб-студий, систем продвижения или самостоятельно занимаясь раскруткой сайта, нужно постоянно следить за результатами проделанной работы. Это помогает определить,

Анализ сайта онлайн бесплатно
Анализ конкурентов – дело непростое и трудоёмкое, но без него никак не обойтись при смене алгоритма или в случаях, когда сайт надежно застопорился и никак не двигается по некоторым запросам. Знакома такая

Где покупать ссылки для продвижения сайта
Правильно сформированный список поисковых запросов один из самых важных моментов для продвижения сайта. Ошибки на этом этапе приведут к тому, что потенциальные заказчики или посетители сайта попросту

Как снять пароль на андроиде
  Имейте в виду: сброс пароля вышеупомянутым методом вероятен только при наличии активного интернет-соединения на Вашем телефоне либо планшете с Android. Непринципиально, применяется при этом доступ средством

Настольный хоккей минск
Вы решили приобрести pansionat-peschanoe.com.ua? Конкретно хоккей, а не аэрохокей? Наша статья поможет вам сделать верный выбор. Если у вас еще останутся вопросы, то наши менеджеры готовы ответить на

Ephebopus rufescens
Ephobopus rufescens Класс – Паукообразные Отряд – Пауки Семейство – Птицееды истинные Род – Ephebopus Фронтальные ноги у их удлинённые, и малость сплюснутые на концах. Раздражительные волоски у этих пауков

Медтехника в ростове
Магазин медтехники – вариант бизнеса для тех, кто не желает возиться с лицензиями и ворохом разрешительной документации. Такового количества допусков и требований, предыдущих, к примеру, открытию аптеки,

Астана квартира посуточно
Компания «Мир Квартир» - это большой выбор квартир в Астане посуточно. Наша компания предлагает снять квартиру в Астане без посредников и не переплачивать за услуги непонятного свойства. Останавливая



Новости

Забыл пароль?

samsung galaxy зависает?

Забыл пароль от вконтакте?